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    ELISPOT斑點(diǎn)的特征

    作者:admin 信息來(lái)源:達科為 日期:20130830 打印 字體:  
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        “一個(gè)陽(yáng)性細胞,對應一個(gè)ELISPOT斑點(diǎn)”,這是ELISPOT檢測的理論前提。無(wú)數的實(shí)驗也證明了這一點(diǎn)?,F有的抗體技術(shù)以及酶聯(lián)放大技術(shù)確實(shí)可以把單個(gè)細胞分泌細胞因子的行為記錄下來(lái),ELISPOT板上的每一個(gè)斑點(diǎn)就是好的證明。下面我們來(lái)看一看ELISPOT斑點(diǎn)的特征。


        圓形,有暈核結構


        這是判定真假ELISPOT斑點(diǎn)的主要標準。ELISPOT斑點(diǎn)有

    這種結構可以從幾何學(xué)的原理得到很好的理解和解釋?zhuān)ㄈ鐖D

    1.2所示)。懸浮在ELISPOT板膜上的細胞,它分泌細胞因子

    是沒(méi)有方向性的,均勻地向四面八方擴散,如果擴散到

    ELISPOT板膜,就會(huì )被板膜上的包被抗體捕獲。在所有從細胞到斑膜的路徑中,有條路徑短,這就是位于細胞正下方到板膜的垂直距離。路徑越短,擴散中耗散損失就越少,到達該點(diǎn)的細胞因子就越多,將來(lái)顯色的時(shí)候顏色就越深。以垂直距離點(diǎn)為圓心,向外畫(huà)一系列的同心圓,同心圓的直徑越大,細胞因子擴散的距離就越長(cháng),耗散越多,到達的細胞因子就越少,顏色就越淺。當超過(guò)一定距離之后,擴散到達的細胞因子就減少到背景水平了,這就是斑點(diǎn)的邊界。


        大小不均一,正態(tài)分布


        ELISPOT斑點(diǎn)要比產(chǎn)生它的那個(gè)細胞大很多。我們知道,

    哺乳動(dòng)物細胞的直徑約是5-10μm,而ELISPOT斑點(diǎn)的直徑通常是50-150μm,比細胞大10倍以上。

        同一類(lèi)陽(yáng)性細胞,受到相同的刺激,產(chǎn)生的斑點(diǎn)大小也不完全相同。這些斑點(diǎn)大小不一,但是如果把它們的直徑統計出來(lái),這發(fā)現它們呈正態(tài)分布的,見(jiàn)圖1.3。
        需要說(shuō)明的是,不同的細胞,對不同的刺激物,不同的細胞因子,ELISPOT斑點(diǎn)的直徑(平均直徑)也不同。通常來(lái)說(shuō),T細胞產(chǎn)生的斑點(diǎn)較大,單核巨噬細胞產(chǎn)生的斑點(diǎn)??;特異性的抗原(多肽或者蛋白)刺激產(chǎn)生的斑點(diǎn)大,非特異性的有絲分裂原(PHA、ConA等)刺激產(chǎn)生的斑點(diǎn)??;IFN-γ、IL-4等細胞因子的斑點(diǎn)大,IL-10、IL-12、Granzyme B之類(lèi)的細胞因子的斑點(diǎn)小。
        如果一次實(shí)驗中有兩類(lèi)細胞同時(shí)受到刺激,比如T細胞與巨噬細胞,或者一次實(shí)驗中T細胞受到兩種不同的刺激物刺激,比如蛋白抗原與內毒素(大腸桿菌表達的蛋白很可能含有較高濃度的內毒素),那么同一個(gè)孔中就會(huì )出現兩種不同的斑點(diǎn)。這兩種斑點(diǎn)用肉眼很難區別,但是如果對它們直徑分布做統計作圖的話(huà),就會(huì )有別于圖1.3中的單峰分布,而是呈現雙峰分布。
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