Expedeon的TruePrime?帶您探索單細胞基因組的奧秘

單細胞全基因組測序是在單細胞水平上對全基因組進(jìn)行擴增與測序的一項技術(shù)，是近年來(lái)研究最為熱門(mén)最為前沿的技術(shù)之一。原理非常簡(jiǎn)單，首先將要研究的單個(gè)細胞分離出來(lái)進(jìn)行全基因組DNA擴增，獲得高覆蓋率和完整的基因組之后進(jìn)行高通量測序，進(jìn)而揭示單個(gè)細胞間的基因差異。因此，在擴增過(guò)程中獲得高覆蓋率以及高保真性的擴增產(chǎn)物是得到全面準確測序結果的必要條件。

傳統的PCR方法在擴增過(guò)程中容易出現較多的擴增偏倚、基因缺失等現象，尤其是在單細胞擴增過(guò)程中容易丟失大量序列。而近年來(lái)發(fā)展出來(lái)的MDA（Multiple Displacement Amplification,多重置換擴增）技術(shù)不僅具有高分辨率和高基因組覆蓋度，而且具有更好的敏感性和特異性，因而是公認較好的單細胞基因組擴增技術(shù)。下面就為大家介紹一款來(lái)自Expedeon公司基于MDA技術(shù)的單細胞全基因組擴增試劑盒TruePrime^? Single Cell WGA Kit。

TruePrime^?采用MDA技術(shù)，基于新型的TthPrimPol 引物酶和Phi29 DNA聚合酶，擴增過(guò)程無(wú)需添加隨機引物，減少了擴增偏倚，提高了擴增過(guò)程的覆蓋率和保真性，并且對于污染的外源DNA不敏感，可重復性好。TruePrime^?可用于單個(gè)細胞或少量細胞的全基因組擴增，與常見(jiàn)的NGS平臺如Illumina和IonTorrent等兼容性良好。

△圖1：基于TthPrimPol 引物酶和Phi29 DNA聚合酶的擴增原理

TruePrime^?技術(shù)優(yōu)勢

No1. 起始樣本量低

△圖2：使用人體全基因組樣本進(jìn)行連續倍比稀釋后用TruePrime^?進(jìn)行擴增，Ion Torrent進(jìn)行測序分析

結果表明僅使用1fg 的樣本即可以擴增出95%以上的人體基因組片段；而使用隨機引物擴增的結果中，約有20%不匹配任何生物體的非特異性序列（右下圖）。

No2. 高保真性

△圖3：分離單個(gè)HEK293細胞，按照TruePrime^?說(shuō)明書(shū)擴增3小時(shí)和6小時(shí)，使用PicoGreen試劑盒檢測DNA產(chǎn)量

分析數據表明，TruePrime^?擴增結果和陰性對照組（原始樣品）的各項數據差異均最小。

No3. 高覆蓋率

△圖4：左圖：TruePrime^?擴增產(chǎn)物和原始樣本的染色體覆蓋率對比；

右圖：3號染色體圖譜的覆蓋模型，TruePrime^?擴增得到的DNA與未擴增的DNA覆蓋率接近。

擴增能力強，無(wú)引物互作，無(wú)擴增偏倚，覆蓋率高，保真性好，重復性好，集諸多優(yōu)勢于一身的TruePrime^?，還有什么理由不選擇呢？TruePrime^?會(huì )為您的單細胞測序工作帶來(lái)極大的便利！除此之外，Expedeon還提供用于擴增cfDNA, circular DNA等多種類(lèi)型DNA的試劑盒喲！

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Expedeon（英國）是世界領(lǐng)先的生物分子結合技術(shù)和服務(wù)專(zhuān)業(yè)公司。公司為研究機構的科學(xué)家和商業(yè)生產(chǎn)提供相關(guān)試劑產(chǎn)品。公司提供包括基因組學(xué)、免疫學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)等相關(guān)產(chǎn)品。主要產(chǎn)品線(xiàn)包括Expedeon^?, Lightning-Link^?, InnovaCoat^?,Thunder-Link^?, RunBlue^?, GELFREE^?, TruePrime^?,Sunscript^?, InstantBlue?等。產(chǎn)品提供給全球的科研實(shí)驗室，制藥企業(yè)，生物技術(shù)和診斷公司等。