微生物宏基因組文庫構建必備——Fosmid library kit

雖然微生物的培養技術(shù)已經(jīng)發(fā)展了很多年，但是環(huán)境中可培養的微生物比例仍然較低，這就阻礙了對微生物多樣性的研究和有益微生物資源的挖掘利用。利用宏基因組學(xué)對微生物的群落結構組成和微生物功能基因的挖掘，能極大地擴展微生物資源的利用空間。目前科學(xué)家們已利用土壤、海水、人唾液等環(huán)境樣品成功構建了宏基因組文庫，從而篩選到具有生物活性物質(zhì)的各種酶類(lèi)及一些次生代謝產(chǎn)物，包括脂酶/酯酶、蛋白酶、淀粉酶、氧化酶、幾丁質(zhì)酶、核酸酶、膜蛋白、4-羥基丁酸代謝酶系、生物素合成酶系、色素、抗菌抗腫瘤活性物質(zhì)及抗生素抗性基因等。

宏基因組學(xué)（metagenomics）是一種以環(huán)境樣品中的微生物群體所有基因組作為研究對象，利用基因組學(xué)的研究策略，研究環(huán)境樣品中所包含的全部微生物的遺傳組成及其群落功能的研究微生物多樣性的方法。在宏基因組研究中，穩定的大片段基因組文庫是生物基因組學(xué)研究的基礎材料平臺。一般流程包括從環(huán)境樣品中提取基因組DNA，克隆DNA到合適的載體，導入宿主菌體，篩選目的轉化子，進(jìn)行高通量測序分析等工作。

在基因文庫構建的過(guò)程中，盡量插入大片段DNA以獲得完整的代謝途徑多基因簇是很有必要的。目前多采用細菌人工染色體(BAC)、粘粒（Cosmid）載體、λ噬菌體克隆載體、Fosmid克隆載體。Fosmid載體由于其插入片段大小適中、易于構建、穩定性好、拷貝數可誘導等優(yōu)點(diǎn)，越來(lái)越廣泛地被應用于物理作圖、基因挖掘、輔助測序等工作。

LGC(Lucigen)提供Fosmid文庫構建試劑盒，該試劑盒中的Fosmid載體是行業(yè)金標準(原屬于Epicentre產(chǎn)品），可完成各種生物樣本編制完整和無(wú)偏向的Fosmid文庫，利用自動(dòng)誘導液保證單拷貝和誘導高拷貝數量的需要。

△Fig1. CopyControl? Fosmid Library Production Kits實(shí)驗流程圖

技術(shù)優(yōu)勢

• CopyControl? pCC1FOS和pCC2FOS載體已經(jīng)過(guò)線(xiàn)性化、去磷酸化處理，可直接進(jìn)行連接反應，可插入40 kb的DNA片段；

• 不需要限制性?xún)惹忻赶蛎}沖凝膠電泳來(lái)準備用于克隆的基因組DNA；

• 使用pCC2FOS載體可以最大化高通量末端測序結果；

• 可以誘導單拷貝到每個(gè)細胞50拷貝，安全地獲得較高的DNA產(chǎn)量，同時(shí)保持了穩定克隆單拷貝數；

• 高效率的lambda包裝蛋白消除了假陽(yáng)性背景。

△Fig2. CopyControl? 載體圖譜

另外，LGC(Lucigen)還提供Fosmid提取試劑盒、Lambda包裝提取物、誘導液等配套產(chǎn)品。如果您對BAC文庫感興趣，也可以了解下LGC(Lucigen) 公司的CopyRight? v2.0 BACKit，該克隆試劑盒可插入200kb DNA片段，并且可誘導單拷貝至高拷貝，獲得高產(chǎn)量的DNA。

*產(chǎn)品詳情請復制以下鏈接到瀏覽器查看：https://www.lucigen.com/CopyRight-v2.0-BAC-Cloning-Kits-pSMART-BAC-and-pEZ-BAC/

相關(guān)產(chǎn)品列表

LGC（Lucigen）：Lucigen公司成立于1998年，提供各類(lèi)用于分子生物學(xué)研究相關(guān)產(chǎn)品，可以使研究者成功克隆較難克隆的基因。2017年Lucigen收購了Epicentre Technologies基因組試劑盒、酶和輔助試劑等產(chǎn)品線(xiàn)，2018年又被英國LGC公司收購，公司合并后改名為 Biosearch technologies，專(zhuān)注于基因組學(xué)研究。目前產(chǎn)品線(xiàn)主要包括：體外轉錄、基因克?。?/span>BAC克隆試劑盒）、感受態(tài)細胞（TG1噬菌體文庫構建感受態(tài)）、體外擴增、轉座子突變、蛋白表達、核酸提取等。