ELISPOT技術(shù)的優(yōu)勢

酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)（ELISPOT）技術(shù)是當今世界上檢測生物體細胞免疫水平的技術(shù)。它集高靈敏度、高可信度、高通量、單細胞水平、功能性檢測與低成本等諸多優(yōu)點(diǎn)于一身，在國內外免疫學(xué)界獲得了廣泛的應用，成為主流免疫學(xué)檢測技術(shù)之一。我們來(lái)一一詳述這些優(yōu)點(diǎn)。

靈敏度高 
理論上，ELISPOT高達百萬(wàn)分之一，也就是說(shuō)哪怕一百萬(wàn)個(gè)陰性細胞中只有一個(gè)陽(yáng)性細胞，ELISPOT能把這個(gè)陽(yáng)性細胞檢測出來(lái)。說(shuō)來(lái)也沒(méi)什么神奇之處，只要細胞狀態(tài)好，陰性細胞就不會(huì )產(chǎn)生斑點(diǎn)。而有一個(gè)陽(yáng)性細胞，就會(huì )產(chǎn)生一個(gè)斑點(diǎn)，反過(guò)來(lái)，一個(gè)斑點(diǎn)就證明了一個(gè)陽(yáng)性細胞的存在，樣哪怕這個(gè)陽(yáng)性細胞混雜在一百萬(wàn)個(gè)陰性細胞中，ELISPOT能把這個(gè)陽(yáng)性細胞檢測出來(lái)。

實(shí)踐中，由于一個(gè)ELISPOT孔容納不了100萬(wàn)細胞，只能放50-60萬(wàn)細胞。再者，50-60萬(wàn)陰性細胞出一兩個(gè)自發(fā)斑點(diǎn)也算正常，所以實(shí)驗組的孔要想有顯著(zhù)的統計學(xué)意義，需要出4-5個(gè)斑點(diǎn)。這也就是說(shuō)，只要陽(yáng)性細胞頻率大于4個(gè)/60萬(wàn)細胞，就可以被ELISPOT檢測出來(lái)。這算出來(lái)的實(shí)際靈敏度為十五萬(wàn)分之一。這樣的靈敏度在一般客戶(hù)的實(shí)驗室都能達到，如果實(shí)驗再精細一些，細胞處理得再好一些，靈敏度還可以提高一倍，達到三十萬(wàn)分之一。作為對比，采用流式細胞儀的方法（細胞內細胞因子染色法），對于陽(yáng)性細胞的檢測靈敏度只有千分之一，比ELISPOT技術(shù)要低兩個(gè)數量級！

單細胞水平 
與流式技術(shù)一樣，ELISPOT也是一種單細胞水平的檢測。作為對比，ELISA法、51Cr釋放法、細胞增殖實(shí)驗法都是群體水平的檢測。如果群體細胞因子水平提高，既有可能是分泌細胞因子的細胞數量增加，也有可能是分泌細胞的數量沒(méi)增加而單個(gè)分泌水平增加。這種區別對研究生物體的細胞免疫是很重要的，但是群體水平的檢測不能區別出來(lái)，只有單細胞水平的檢測能夠勝任。也就是說(shuō)，單細胞水平的檢測可以提供更多的信息。

功能性檢測 
ELISPOT檢測到的細胞因子不是實(shí)現存在的，而是在檢測的過(guò)程中，被加入的刺激物刺激而分泌出來(lái)的。斑點(diǎn)的強弱和數量反映了細胞對刺激物的反應能力和分泌細胞因子的能力，這是體現細胞免疫反應的重要的功能指標。作為對比，ELISA只能檢測細胞的遺留物，充其量就是間接的反映了細胞功能。而流式細胞內細胞因子染色法需要的把本該分泌出來(lái)的細胞因子人為的囚禁在細胞之內，因能反映細胞應對刺激生產(chǎn)細胞因子的能力，不能反映其分泌細胞因子的能力，畢竟細胞因子要分泌到包外才能發(fā)揮功能活力。另外，流式方法也不能去除一類(lèi)假陽(yáng)性細胞，這類(lèi)細胞的細胞因子含量豐富，但是沒(méi)有分泌功能。

實(shí)現高通量檢測 
ELISPOT是在96孔微孔板上進(jìn)行的，是一種高通量的檢測與篩選方法。一位有經(jīng)驗的實(shí)驗者一次可以處理上百份細胞樣品與數十種抗原，測定它們的反應強度。作為對比，流式方法的樣品細胞需要在獨立的離心管中進(jìn)行，遠未實(shí)現高通量，工作效率要低很多。

直觀(guān)，可信度高 
相對ELISA法、流式細胞因子染色法、測CTL的51Cr釋放法而言，ELISPOT是直觀(guān)的方法，一個(gè)陽(yáng)性細胞一個(gè)斑點(diǎn)，清清楚楚，毫無(wú)疑問(wèn)。只要實(shí)驗遵循標準化的操作方法，該檢測的重復性很好。另外，ELISPOT檢測的樣品細胞可以在液氮里面長(cháng)期冷凍存放，治療（或者免疫）前后的細胞可以做對比檢測，細胞免疫水平的變化一目了然，可信度高。

檢測成本低 
流式方法需要昂貴復雜的流式細胞儀，但是ELISPOT檢測并不需要特殊的儀器設備，充其量在檢測規模擴大了之后需要購置全自動(dòng)的斑點(diǎn)圖像分析儀。另外，ELISPOT試劑相對于ELISA與流式抗體也要便宜很多。達科為公司代理的進(jìn)口U-CyTech未包被ELISPOT試劑盒，96test價(jià)格在1000元左右，達科為公司推出的Quick Spot系列預包被ELISPOT試劑盒的價(jià)格也不到2000元?？梢哉f(shuō)，ELISPOT是一項功能強大、物美價(jià)廉的檢測技術(shù)。