驚艷登場(chǎng)！臨床級治療性病毒載體生產(chǎn)必備轉染試劑—PEIpro?-GMP

2018年3月13日南京傳奇生物科技有限公司的LCAR-B38M CAR-T自體回輸制劑臨床申請獲批，成為中國首個(gè)獲批的CAR-T療法。隨著(zhù)新病毒載體系統的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)，一些基于基因和細胞的療法距離獲得臨床批準和遺傳疾病治療的商業(yè)化應用又更進(jìn)了一步。使用正確的瞬時(shí)轉染方法對病毒載體生產(chǎn)至關(guān)重要，以確保從工藝開(kāi)發(fā)到高質(zhì)量級別病毒載體生產(chǎn)的靈活性和可重復性。

法國Polyplus-transfection^?提供一系列基于PEI的高品質(zhì)轉染試劑， 研發(fā)級PEIpro^?可用于工藝開(kāi)發(fā)過(guò)程中建立病毒載體生產(chǎn)體系，臨床前級PEIpro^?-HQ和最高質(zhì)量級別即完全GMP級別的PEIpro^?-GMP可用于臨床病毒載體的生產(chǎn)，滿(mǎn)足細胞治療和基因治療的質(zhì)量要求。

PEIpro^?-GMP是最高質(zhì)量級別的PEI，是市場(chǎng)上唯一提供帶有MPC連接器和焊接管的袋裝轉染試劑，非常適用于制造符合GMP標準的臨床級治療性病毒載體（如AAV和慢病毒）的封閉生產(chǎn)系統。使用PEIpro^?或PEIpro^?-HQ建立的大規模轉染方案可確保與PEIpro^?-GMP的無(wú)縫銜接，可用于制造治療性病毒載體和后期臨床試驗的商業(yè)化。

表1.Polyplus-transfection^?提供一系列不同級別PEIpro^?，滿(mǎn)足從工藝開(kāi)發(fā)、臨床前、到臨床級別病毒載體的生產(chǎn)需求

圖1. 使用不同級別PEIpro^?，可重復獲得相似的病毒滴度

將懸浮液HEK-293T細胞以1×10 ⁶ cells/ mL的密度接種在FreeStyle^TM F17培養基中，并按照相同方案，分別用PEIpro^?，PEIpro^?-HQ和PEIpro^?-GMP試劑轉染。用Helper Free Packaging System（Cell Biolabs）生產(chǎn)AAV，轉染后72h，通過(guò)檢測GFP報告基因表達來(lái)檢測病毒滴度。

PEIpro^?系列產(chǎn)品優(yōu)勢多多，一起來(lái)扒一扒~

• 經(jīng)優(yōu)化的線(xiàn)性聚乙烯亞胺（PEI），毒性更低，轉染效率更高

圖2. PEI聚合物化學(xué)性質(zhì)的優(yōu)化

由于長(cháng)片段的PEI對細胞有毒性，而短片段PEI結合DNA能力較差（見(jiàn)紅色），所以?xún)?yōu)化PEI的片段大小，降低其分散性能減少細胞毒性，同時(shí)增加結合DNA的能力（見(jiàn)藍色）和轉染重復性。

• 高滴度病毒生產(chǎn)的最佳選擇

表2. PEIpro^?是采用貼壁或懸浮細胞培養體系生產(chǎn)病毒的最佳選擇

不管細胞培養體系和生產(chǎn)規模如何， PEIpro^?和PEIpro^?-HQ 均可獲得較高的病毒產(chǎn)量，慢病毒的病毒滴度超過(guò)10⁷IG/mL，而AAV的病毒滴度超過(guò)10⁹ VG/mL。

• 與其它PEIs相比，PEIpro^?所需更少轉染試劑和較少/相似的DNA用量

圖3.與其它PEIs相比，PEIpro^?所需更少轉染試劑和較少/相似的DNA用量

懸浮HEK-293以1×10⁶cells/mL的密度接種在無(wú)血清培養基中，使用重懸后濃度為1 mg/mL的PEIpro^?、PEI “Max” 和L-PEI 25 kDa (Polysciences, Warrington, PA)進(jìn)行轉染。采用常規熒光素酶測定法在轉染后48h測定熒光素酶的表達

• 與磷酸鈣相比能得到更高病毒滴度

圖4.PEIpro^?與磷酸鈣相比能得到更高的病毒滴度

無(wú)血清培養體系培養HEK-293細胞，并產(chǎn)生慢病毒。每75 cm²燒瓶加入15 μg DNA和30 μl PEIpro^?，轉染48小時(shí)后，用流式細胞術(shù)檢測上清中的病毒滴度。

• 批次間有很好的穩定性和可重復性

圖5.使用不同批次PEIpro?生產(chǎn)蛋白的得率具有極佳的重復性

懸浮HEK-293細胞以1×10⁶cells/mL 密度接種在無(wú)血清培養基中，按照PEIpro^?標準操作流程進(jìn)行轉染。轉染48h后采用 protein G親和定量 (HPLC)法來(lái)檢測IgG3-Fc的產(chǎn)量。

產(chǎn)品信息

Polyplus-transfection^?，中文名保利嘉，是來(lái)自法國的一家專(zhuān)注核酸轉染的生物技術(shù)公司。因為專(zhuān)注所以專(zhuān)業(yè)，其產(chǎn)品適用于體內和體外轉染，包括DNA、siRNA及其他寡核苷酸、蛋白和多肽轉染。高效率、低毒性、操作簡(jiǎn)便和高性?xún)r(jià)比的產(chǎn)品受到廣大科研工作者喜愛(ài)，廣泛應用于基因功能研究、蛋白生產(chǎn)、病毒包裝和動(dòng)物模型的構建。公司于2002年獲得ISO 9001證書(shū)。