四步搞定RNA檢測！Stellaris? RNA FISH“極簡(jiǎn)”指南

什么是Stellaris^TM RNA FISH?

Stellaris^TM RNA FISH（熒光原位雜交）是一種RNA可視化方法，可使用熒光顯微鏡同時(shí)定位和定量細胞水平上單個(gè)RNA分子。一套Stellaris^TM RNA FISH探針由多達48條獨特的探針組成，每個(gè)探針都標有一個(gè)熒光基團，它們共同結合靶標RNA產(chǎn)生可見(jiàn)的光點(diǎn)。

Stellaris^TM RNA FISH操作簡(jiǎn)單，無(wú)需分離、純化或擴增，當天即可出結果，并且在樣品類(lèi)型、種屬和應用方面通用。Stellaris^TM RNA FISH探針可標記多種不同的染料，可以同時(shí)檢測不同的靶標RNA。

Stellaris^TM RNA FISH操作步驟

步驟A：準備樣品
將培養的、貼壁的或切片的樣品轉移到1號蓋玻璃上，并用酒精透化。不需要蛋白酶處理！
注意：針對不同樣本、組織等制備的具體操作可登錄以下網(wǎng)址查詢(xún)。

https://www.biosearchtech.com/support/resources/stellaris-rna-fish/stellaris-protocols
步驟B：探針雜交
雜交可以在37°C標準實(shí)驗室培養箱中4-16h完成。
步驟C：清洗樣本
去除雜交緩沖液、短暫的洗滌液孵育能夠去除多余的探針，此步驟的總時(shí)間為1-1.5h。

步驟D：圖像采集
使用標準熒光顯微鏡進(jìn)行樣品成像。我們建議使用寬視場(chǎng)熒光顯微鏡，但其他成像平臺也可以與Stellaris^TM RNA FISH探針一起使用。圖像處理可使用在線(xiàn)工具完成，該工具將Z Stack圖像轉換為最大強度投影圖像。

步驟A：準備樣品
將培養的、貼壁的或切片的樣品轉移到1號蓋玻璃上，并用酒精透化。不需要蛋白酶處理！
注意：針對不同樣本、組織等制備的具體操作可登錄以下網(wǎng)址查詢(xún)。

https://www.biosearchtech.com/support/resources/stellaris-rna-fish/stellaris-protocols
步驟B：探針雜交
雜交可以在37°C標準實(shí)驗室培養箱中4-16h完成。
步驟C：清洗樣本
去除雜交緩沖液、短暫的洗滌液孵育能夠去除多余的探針，此步驟的總時(shí)間為1-1.5h。

步驟D：圖像采集
使用標準熒光顯微鏡進(jìn)行樣品成像。我們建議使用寬視場(chǎng)熒光顯微鏡，但其他成像平臺也可以與Stellaris^TM RNA FISH探針一起使用。圖像處理可使用在線(xiàn)工具完成，該工具將Z Stack圖像轉換為最大強度投影圖像。

可實(shí)現多重檢測

Stellaris^TM RNA FISH探針可結合可見(jiàn)光譜中的各種熒光基團，包括LGC Biosearch Technologies的CAL Fluor?系列和Quasar?系列染料，用于多重分析。多重檢測中的染料選擇在很大程度上取決于成像平臺上可用的濾光片，可以設計一個(gè)包含DAPI核染色和三個(gè)Stellaris^TM RNA FISH探針組的檢測，使得這些探針組合光譜重疊最小。

多種實(shí)驗方法結合

Stellaris^TM RNA FISH還可以與qPCR、DNA FISH、IHC（免疫組化）、IF（免疫熒光）和western blotting等技術(shù)結合，提供更多檢測信息。