融合蛋白標簽的“利器”——TEV蛋白酶

昨天，小達君為大家帶來(lái)了抗體純化用IBA新品—Protein A Agarose，今天我們繼續來(lái)說(shuō)說(shuō)蛋白表達純化那點(diǎn)事兒。

通常，我們會(huì )利用融合標簽與目的蛋白的融合表達實(shí)現某些實(shí)驗目的，例如，蛋白純化（Strep-tag、His）、增強蛋白的可溶性（MBP、GST）、增加蛋白的表達量（Flag、GST）、報告目的蛋白表達情況（GFP）等。但是，當融合標簽完成了它的使命，又會(huì )影響下游的某些實(shí)驗時(shí)，例如免疫動(dòng)物、影響目的蛋白活性，我們就需要考慮如何將其去除。小達君為您推薦一款去除融合標簽的利器——Lucigen的SelecTEV? Protease，簡(jiǎn)單的實(shí)驗操作即可得到較純的目的蛋白。

SelecTEV?蛋白酶是一種基因工程改造的煙草蝕刻病毒（TEV）蛋白酶，通過(guò)His標簽的親和層析從大腸桿菌中純化，SDS-PAGE分析表明其純度為90％。SelecTEV?蛋白酶能夠識別Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly七個(gè)氨基酸以及與其密切相關(guān)的序列，并在Gln和Gly殘基之間進(jìn)行切割。 這七種氨基酸序列在蛋白質(zhì)中很少見(jiàn)，使得SelecTEV?蛋白酶成為從融合蛋白中去除標簽的理想選擇。利用蛋白酶N-末端的His標簽通過(guò)親和層析即可從酶切反應中除去SelecTEV?蛋白酶。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

• 經(jīng)過(guò)基因工程改造，與天然蛋白酶相比具有更高的特異性，活性和穩定性；

• 帶有His標簽（六個(gè)組氨酸），更易于去除；

• 1unit SelecTEV?蛋白酶在30°C下、1h內可以切割≥85％的3μg對照底物；

• SelecTEV?蛋白酶最佳切割溫度30°C，但在很寬的溫度（4 - 30°C）和pH（6.0 - 8.5）范圍內有效，以適應您的特定蛋白質(zhì)。

實(shí)驗流程如下：

酶切反應完成后，用標簽特異性純化柱去除融合標簽，收集流穿液。為去除流穿液中的TEV蛋白酶，利用鎳柱進(jìn)行二次純化，得到的流穿液中的蛋白即為純的目的蛋白。

產(chǎn)品信息：

Lucigen公司成立于1998年，提供各類(lèi)用于分子生物學(xué)研究相關(guān)產(chǎn)品，可以使研究者成功克隆較難克隆的基因。2016年Lucigen收購了Illumina旗下Epicentre產(chǎn)品線(xiàn)，2018年又被英國LGC公司收購。目前產(chǎn)品線(xiàn)主要包括：體外轉錄、基因克?。˙AC克隆試劑盒）、感受態(tài)細胞（TG1噬菌體文庫構建感受態(tài)）、體外擴增、轉座子突變、蛋白表達、核酸提取等。