如何提高噬菌體展示文庫的庫容?

一個(gè)好的噬菌體抗體庫需要具備較大的容量和良好的多樣性，如果庫容量較小，則難以獲得高親和力的抗體。那么想要獲得較大庫容和多樣性豐富的噬菌體文庫，有哪些可以?xún)?yōu)化的因素呢？
 

一、選擇高轉化效率的大腸桿菌（感受態(tài)細胞）

噬菌體文庫的庫容會(huì )受大腸桿菌轉化效率的限制，選擇高效率的電轉感受態(tài)細胞，能有效的增加噬菌體文庫的庫容，另外也可以通過(guò)增加轉化次數來(lái)累積庫容。在噬菌體展示文庫構建過(guò)程中，使用比較多的感受態(tài)細胞有TG1、XL1-Blue、SS320等。

在進(jìn)行轉化實(shí)驗時(shí)，要想獲得高的轉化效率，質(zhì)粒/連接產(chǎn)物的純度、電轉的條件、質(zhì)粒/連接產(chǎn)物的加入量以及操作的規范性也是需要注意的地方。

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達科為生物代理的LGC（Lucigen）提供轉化效率≧4×10¹⁰ cfu/μg的噬菌體文庫構建感受態(tài)細胞~

申請方式

2、填寫(xiě)相關(guān)信息，審核通過(guò)即可免費獲得試用裝?。總€(gè)用戶(hù)僅限申請一次，已購買(mǎi)過(guò)該產(chǎn)品的用戶(hù)不參與此次活動(dòng)）

試用產(chǎn)品信息

高效噬菌體文庫構建感受態(tài)——Phage Display ElectroCompetent Cells

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• 試用裝包含3種電轉感受態(tài)細胞【TG1, SS320 (MC1061 F'), ER2738】，每種感受態(tài)各4個(gè)反應；

• 1、抗體或多肽噬菌體展示庫構建的最佳選擇；

• 2、最高轉化效率的TG1感受態(tài)細胞，轉化效率≧4×10¹⁰ cfu/μg；

• 3、具有琥珀和非琥珀抑制基因的靈活性選擇；

• 4、生成更大的基因文庫，加速研究發(fā)現。

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更多感受態(tài)細胞試用裝

二、輔助噬菌體投入量的優(yōu)化及改造

噬菌體擴增的最終目的是將噬菌粒中單一拷貝的抗體片段基因通過(guò)噬菌體的擴增過(guò)程變成10-100個(gè)拷貝。不同文庫大小的噬菌體庫在擴增過(guò)程中需要的擴增體積是不一樣的，要想獲得大庫容的噬菌體文庫，以下條件需要提前進(jìn)行計算評估。

1、擴增過(guò)程中含有噬菌粒的大腸桿菌的數目和體積；

2、對應加入多少輔助噬菌體進(jìn)行有效感染（一般輔助噬菌體和TG1的比值MOI在10-20：1時(shí)能保證所有的TG1被感染上）；

3、擴增后加入多少含有噬菌粒的噬菌體進(jìn)行淘選（如果輔助噬菌體的展示效率只有10%，那最后要保證噬菌體抗體庫中每個(gè)抗體有10-100個(gè)抗體拷貝數的話(huà)，輔助噬菌體的投入量就應該是文庫大小的100-1000倍）

注：輔助噬菌體在TG1處于對數生長(cháng)期時(shí)有比較好的感染效率，TG1處于對數生長(cháng)期的OD600值在0.4-0.8。（1OD代表的菌濃度為1×10⁹個(gè)/ml）。

另外，我們也可以選擇展示效率較高的輔助噬菌體，比如gIII基因缺失的Hyperphage（Progen, cat#PRHYPE）,它能使得抗體或多肽在噬菌體展示的拷貝數增多(up to 5 vs. 0.01) ，從而提高淘選的效率。

三、采用體內重組技術(shù)進(jìn)一步增加噬菌體文庫的庫容和多樣性

Cre-loxp體內重組系統可以有效增大抗體庫的庫容性，并且在對文庫進(jìn)行的每一輪篩選中，所有的抗體都可以再次進(jìn)行重組，保證了抗體庫的多樣性，因此該技術(shù)也為高容量抗體庫的發(fā)展提供了有利的工具。近期，YUAN DONG[1]等利用CreLoxP重組技術(shù)構建了人源的scFv噬菌體文庫，并對antiPCSK9抗體進(jìn)行了篩選。

參考文獻

[1] YUAN DONG, FANWEI MENG,et.al. Construction and application of a human scFv phage display library based on CreLoxP recombination for antiPCSK9 antibody selection. INTERNATIONAL JOURNAL OF MOlecular medicine 47: 708-718, 2021.

Lucigen（美國）公司成立于1998年，提供各類(lèi)用于分子生物學(xué)研究相關(guān)產(chǎn)品，可以使研究者成功克隆較難克隆的基因。2017年Lucigen成為Epicentre Technologies基因組試劑盒、酶和輔助試劑的獨家經(jīng)銷(xiāo)商。2018年該公司被英國LGC收購，統一改名為Biosearch Technologies。目前產(chǎn)品線(xiàn)主要包括：體外轉錄、基因克?。˙AC克隆試劑盒）、感受態(tài)細胞（TG1噬菌體文庫構建感受態(tài)）、體外擴增、轉座子突變、蛋白表達、核酸提取、BHQ?探針、Stellaris?RNA FISH等。