單細胞水平如何進(jìn)行基因表達分析？

基因表達 (gene expression) 是指細胞在生命過(guò)程中，把儲存在DNA中的遺傳信息經(jīng)過(guò)轉錄和翻譯，轉變成具有生物活性的蛋白質(zhì)分子（或RNA分子）。很多疾病的發(fā)生發(fā)展、很多藥物的作用機理、很多生物的代謝調控作用等都和基因表達的變化有關(guān)，因此對基因表達進(jìn)行分析十分重要。由于基因表達是在單個(gè)細胞水平進(jìn)行調控，所以需要用多種方法來(lái)分析單個(gè)細胞如干細胞、神經(jīng)元、發(fā)育組織、激光捕獲切片的基因表達方式。

為了便于研究單細胞的基因表達，美國Signosis公司開(kāi)發(fā)出一種基于SYBR Green的單細胞實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測試劑，該試劑可以使用細胞裂解液直接檢測基因表達水平，無(wú)需RNA制備過(guò)程。

* SYBR Green是廣泛用于雙鏈DNA的特異性染料，常用作實(shí)時(shí)熒光定量PCR報告染料。

小編說(shuō)了半天，下面正式Pick出今日介紹的主角：

與其他定量試劑盒相比，Signosis的試劑盒原理是什么？不同之處？?jì)?yōu)點(diǎn)是？

1）試劑盒包括cDNA合成和PCR擴增的所有試劑：

2）您只需要準備：目的基因特異性引物

3）不同之處在于：無(wú)需額外制備/提取細胞RNA

4）原理圖：

圖1 試劑盒原理：細胞裂解液裂解細胞后直接進(jìn)行反轉錄及隨后的 PCR分析。 

5）結果展示：

圖2  A: 比較Signosis與其他品牌的細胞裂解液。分別對裂解產(chǎn)物中的β-actin進(jìn)行30個(gè)循環(huán)反轉錄PCR。 

B: 基因組DNA污染檢測。Lane1：細胞裂解產(chǎn)物不經(jīng)過(guò)反轉錄直接對β-actin進(jìn)行36個(gè)循環(huán)PCR擴增；Lane2：細胞裂解液反轉錄獲得cDNA后對β-actin進(jìn)行36個(gè)循環(huán)PCR擴增。 

圖3 細胞裂解產(chǎn)物中檢測靶基因。

隨著(zhù)HeLa細胞數的增加，分別用適量細胞裂解液裂解細胞后進(jìn)行反轉錄，而后在7700 PCR儀上進(jìn)行Actin、GAPDH和B2M基因的3復孔qPCR反應。 

6）產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)：

7）FAQs：

a. 細胞裂解液能使用幾次？

每個(gè)試劑盒里包含1mL的細胞裂解液：

b. 有沒(méi)有儀器要求？

兼容SYBR Green的PCR儀。

更多信息請點(diǎn)擊Signosis官網(wǎng)

www.signosisinc.com