這種陰選方法快速簡(jiǎn)單，10分鐘得到想要的活性細胞！

在細胞分選中，陰選通常是指對非目的細胞進(jìn)行標記和去除，來(lái)得到目的細胞。避免通過(guò)直接的標記目的細胞（比如使用表面特異性抗體標記），從而來(lái)減少細胞活化可能。因此，陰選方法的優(yōu)勢在于可以保持目的細胞未受刺激的原始狀態(tài)，分選速度快。不過(guò)相對陽(yáng)選而言純度稍低，而且需要事先對原始樣品的細胞組分有所了解，準備相應的標記抗體。

本文將分享一種新的陰選方法和相關(guān)數據，利用Strep-Tactin^?TACS的瓊脂糖層析柱，這種層析柱既可用于細胞陽(yáng)選，也能用于細胞陰選中。
 

為了評估Strep-Tactin^?TACS瓊脂糖柱細胞陰選的效率，實(shí)驗從外周血單個(gè)核細胞（PBMC）樣品中富集了CD3- CD56+自然殺傷細胞（NK）。材料為Strep-Tactin^?TACS瓊脂糖柱以及生物素化的抗體，僅10分鐘，便完成了細胞陰選 （圖1）。
 

流程如下

 

陰選流程：生物素化抗體與PBMC孵育標記非目的細胞，加入至親和層析柱后，即可收集目的細胞

• 將1 x 107 的PBMC細胞用100μl的Buffer稀釋?zhuān)˙uffer CI：含0.5％ BSA的PBS緩沖液，1 mM EDTA）

• 加入多種生物素化抗體，室溫下孵育5分鐘。生物素化的抗體包含以下幾種，每種抗體0.5 μg：CD235a (erythrocytes), CD14 (monocytes), CD3 (T cells), CD15 (granulocytes), CD19 (B cells), CD36 (thrombocytes), CD123 (hematopoietic stem cells) 和CD279 (PD-1)。

• 將孵育好的樣品加入到1 ml的Strep-Tactin^?TACS瓊脂糖層析柱上（柱子最大結合能力：1 x 108個(gè)細胞）。

• 當樣品完全進(jìn)入柱子后，加入10 ml Buffer洗脫兩次，就可以得到未結合的細胞了。后續使用流式細胞術(shù)檢測富集的NK細胞。 

（此處用到的試劑見(jiàn)文末）

結果與討論

NK細胞從6％的起始豐度（圖2A）通過(guò)富集達到了86％（圖2B）。所有抗體標記的細胞群幾乎均去除，剩余的非NK細胞主要成分為未標記的細胞。數據表明， Strep-Tactin^?TACS瓊脂糖柱不僅可以在陽(yáng)選中使用，還可以搭配適當的抗體標記，有效進(jìn)行細胞陰選。
 

圖2：通過(guò)陰選富集PBMC中的CD56 + NK細胞。Strep-Tactin^?TACS瓊脂糖柱與生物素化抗體結合，從而實(shí)現NK細胞的富集，純度從6％（A）提高到86％（B）（n = 2）

實(shí)驗材料

實(shí)驗中使用的Strep-Tactin^?TACS親和層析柱，主要成分Strep-Tactin^?是鏈霉親和素（Streptavidin）的一種突變體，借助鏈霉親和素-生物素作用原理，Strep-Tactin^?與生物素（biotin）的親和力介于100 pM – 100 fM間。當向含有的Strep-Tactin^?層析柱中加入生物素化的抗體時(shí)，便能將其固定在柱子中，特異性捕獲細胞，進(jìn)行陰選。

抗體的選擇

帶Twin-Strep-tag^?的單克隆抗體在生產(chǎn)和純化更便捷，還可以通過(guò)加入生物素來(lái)洗脫已經(jīng)結合在柱子上的細胞。并且，Twin-Strep-tag^?的單克隆抗體的位置相對更固定一些。

使用生物素化抗體好處在于其與Strep-Tactin^?的親和力相比之下更高，可以稍提高陰選效率，但是總體來(lái)說(shuō)兩種類(lèi)型的抗體對細胞陰選都是非常有效的。
 

圖：?jiǎn)慰寺】贵w用生物素（A）或Twin-Strep-tag^?（B）標記，兩種都可以固定在Strep-Tactin^?TACS瓊脂糖層析柱中。

總而言之，作為靈活的細胞研究工具，Strep-Tactin?TACS瓊脂糖層析柱在細胞分選的應用不僅限于陽(yáng)選，還可以在陰選中結合多種生物素化抗體（或Twin-Strep-tag?標記的抗體）一起使用。整個(gè)細胞分選過(guò)程只需10分鐘，是一種快速有效的細胞陰選方案。

★產(chǎn)品列表★