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ELISpot：?jiǎn)渭毎暯窍碌拿庖吒锩?/h1>
ELISpot檢測最初于1980年代初開(kāi)發(fā)并報道，用于計數分泌特異性抗體的B細胞，隨后，該技術(shù)被調整并應用于定量人或小鼠樣本中產(chǎn)生特定細胞因子的免疫細胞。自此，ELISpot技術(shù)開(kāi)始迅速發(fā)展，并與ELISpot圖像分析相結合，目前已廣泛用于免疫學(xué)研究和臨床應用，可用于測量多種類(lèi)型免疫細胞對微生物病原體、疫苗以及外來(lái)或自身抗原的抗原誘導或自發(fā)性特定細胞因子反應。它的檢測原理為：炎癥細胞分泌的細胞因子被膜上的捕獲抗體捕獲，并通過(guò)二級檢測抗體與在捕獲的細胞因子部位沉淀形成可見(jiàn)斑點(diǎn)的底物結合進(jìn)行可視化。與酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）相比，ELISpot測定的優(yōu)勢在于不僅可以測量單細胞水平的細胞因子反應，而且對產(chǎn)生特異性細胞因子的細胞具有更高的檢測靈敏度。目前ELISpot已成為主流免疫學(xué)檢測技術(shù)之一，在國內外免疫學(xué)界獲得了高度的認可和廣泛的關(guān)注，那么它有哪些優(yōu)點(diǎn)呢？
技術(shù)優(yōu)勢：
1. 高靈敏度：ELISpot理論上可達到百萬(wàn)分之一的靈敏度，即一百萬(wàn)個(gè)細胞中只要有一個(gè)分泌細胞因子的陽(yáng)性細胞就能檢測出來(lái)。
2. 單細胞水平：檢測的是單個(gè)細胞分泌，而非細胞群體的平均分泌，對研究生物體的細胞免疫和細胞功能提供有效的檢測策略。
3. 功能性檢測：動(dòng)態(tài)的免疫檢測，斑點(diǎn)代表分泌細胞在一段時(shí)間內的分泌動(dòng)態(tài)，即“Footprint”。斑點(diǎn)的強弱和數量反映了細胞對刺激物的反應能力和分泌細胞因子的動(dòng)態(tài)能力。
4. 高通量檢測：整個(gè)流程基于96孔微孔板，適用于高通量實(shí)驗和篩選。
5. 重復性和檢測性高：凍存的細胞同樣可進(jìn)行ELISpot檢測。
達優(yōu)ELISpot應用領(lǐng)域及案例：
1. 疫苗研發(fā)：用于評估疫苗誘導的特異性免疫反應。
案例：2020年CDE發(fā)布的《新型冠狀病毒預防用mRNA疫苗藥學(xué)研究》指導原則中強調了mRNA疫苗的質(zhì)量研究需要進(jìn)行體內效力試驗，推薦使用ELISpot技術(shù)檢測評價(jià)mRNA疫苗的細胞免疫反應；2025年發(fā)表文章中也有使用ELISpot技術(shù)檢測評估納米疫苗的免疫反應[1]等；
2. 基因治療：檢測基因治療過(guò)程中可能引起的免疫反應
案例：Kathryn團隊在AAV基因治療藥物Roctavian?的III期臨床試驗中，通過(guò)IFN-γELISpot試驗檢測了16名受試者對AAV5衣殼蛋白的細胞免疫反應[2]；
3. 臨床診斷
案例：Oxford Immunotec公司開(kāi)發(fā)了全球第一個(gè)基于ELISpot原理的T-SPOT.TB結核病診斷試劑盒，用以定量檢測患者血液或體液標本中結核效應T細胞數，根據陽(yáng)性細胞數（即顯色的斑點(diǎn)數）來(lái)判斷患者結核分枝桿菌感染狀態(tài)，輔助臨床診斷和排篩結核。
4. 器官移植
案例：器官移植之前，應用ELISpot對供體與受體做免疫相容性檢測，HLA匹配，則供受體細胞之間相容性好，較少刺激物斑點(diǎn)，提示移植手術(shù)成功率高，反之亦然。在器官移植手術(shù)后，用ELISpot監視患者體內的免疫排斥反應，可以有針對性的用藥，避免盲目的使用免疫抑制劑。
5. 免疫學(xué)基礎研究
案例：根據檢測的細胞因子的不同，ELISpot可以用來(lái)區分被激活的不同的T細胞亞群。例如Th1細胞主要分泌IFN-γ，IL-2和TNF-α，而其他一些細胞因子如IL-4，IL-5和IL-13一般是由Th2細胞分泌的。在過(guò)敏研究中的一個(gè)熱點(diǎn)就是采用ELISpot測定Th2型細胞因子，因為Th2反應是過(guò)敏的主要反應，但通常都是低頻率岀現，需要高度靈敏方法才能被成功檢測到。
那么達優(yōu)可以為大家提供哪些種屬及指標的ELISpot試劑盒呢？
產(chǎn)品列表
達優(yōu)ELISpot產(chǎn)品采用高親和力、高效價(jià)抗體對，經(jīng)預包被PVDF板、低溫冷凍干燥、真空密封包裝等工藝流程制備。成品PVDF板上預包被的抗體分布均勻、效價(jià)穩定，實(shí)驗檢測時(shí)間從3天縮短為2天，大幅度減少無(wú)菌操作的實(shí)驗步驟，減輕實(shí)驗者的勞動(dòng)強度和減少污染的機會(huì )。使得實(shí)驗者能夠輕松、高效地完成復雜的ELISpot檢測實(shí)驗。
ELISpot技術(shù)憑借其靈敏度、功能保留性及多場(chǎng)景兼容性，已成為免疫評估領(lǐng)域的黃金標準。達優(yōu)ELISpot通過(guò)技術(shù)創(chuàng )新與標準化服務(wù)，為疫苗、基因治療、臨床診斷及基礎研究提供可靠工具，推動(dòng)精準醫療與轉化醫學(xué)的快速發(fā)展，另外，達優(yōu)還提供ELISpot讀板服務(wù)哦，如有需要也可聯(lián)系我們！
參考文獻：
[1]Ma M, Li X, Zhong M, Li X, Yu J, et.al. Galloylated Toll-Like Receptor 7/8 Agonist Nanovaccine for Enhanced Tumor Antigen Delivery in Personalized Immunotherapy. ACS Nano. 2025 Apr 1;19(12):11900-11912. doi: 10.1021/acsnano.4c15442.
[2]Patton KS, Harrison MT, Long BR, et.al. Monitoring cell-mediated immune responses in AAV gene therapy clinical trials using a validated IFN-γ ELISpot method. Mol Ther Methods Clin Dev. 2021 May 29;22:183-195. doi: 10.1016/j.omtm.2021.05.012.
ELISpot檢測最初于1980年代初開(kāi)發(fā)并報道，用于計數分泌特異性抗體的B細胞，隨后，該技術(shù)被調整并應用于定量人或小鼠樣本中產(chǎn)生特定細胞因子的免疫細胞。自此，ELISpot技術(shù)開(kāi)始迅速發(fā)展，并與ELISpot圖像分析相結合，目前已廣泛用于免疫學(xué)研究和臨床應用，可用于測量多種類(lèi)型免疫細胞對微生物病原體、疫苗以及外來(lái)或自身抗原的抗原誘導或自發(fā)性特定細胞因子反應。它的檢測原理為：炎癥細胞分泌的細胞因子被膜上的捕獲抗體捕獲，并通過(guò)二級檢測抗體與在捕獲的細胞因子部位沉淀形成可見(jiàn)斑點(diǎn)的底物結合進(jìn)行可視化。與酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）相比，ELISpot測定的優(yōu)勢在于不僅可以測量單細胞水平的細胞因子反應，而且對產(chǎn)生特異性細胞因子的細胞具有更高的檢測靈敏度。目前ELISpot已成為主流免疫學(xué)檢測技術(shù)之一，在國內外免疫學(xué)界獲得了高度的認可和廣泛的關(guān)注，那么它有哪些優(yōu)點(diǎn)呢？
技術(shù)優(yōu)勢：
1. 高靈敏度：ELISpot理論上可達到百萬(wàn)分之一的靈敏度，即一百萬(wàn)個(gè)細胞中只要有一個(gè)分泌細胞因子的陽(yáng)性細胞就能檢測出來(lái)。
2. 單細胞水平：檢測的是單個(gè)細胞分泌，而非細胞群體的平均分泌，對研究生物體的細胞免疫和細胞功能提供有效的檢測策略。
3. 功能性檢測：動(dòng)態(tài)的免疫檢測，斑點(diǎn)代表分泌細胞在一段時(shí)間內的分泌動(dòng)態(tài)，即“Footprint”。斑點(diǎn)的強弱和數量反映了細胞對刺激物的反應能力和分泌細胞因子的動(dòng)態(tài)能力。
4. 高通量檢測：整個(gè)流程基于96孔微孔板，適用于高通量實(shí)驗和篩選。
5. 重復性和檢測性高：凍存的細胞同樣可進(jìn)行ELISpot檢測。
達優(yōu)ELISpot應用領(lǐng)域及案例：
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案例：Kathryn團隊在AAV基因治療藥物Roctavian?的III期臨床試驗中，通過(guò)IFN-γELISpot試驗檢測了16名受試者對AAV5衣殼蛋白的細胞免疫反應[2]；
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案例：Oxford Immunotec公司開(kāi)發(fā)了全球第一個(gè)基于ELISpot原理的T-SPOT.TB結核病診斷試劑盒，用以定量檢測患者血液或體液標本中結核效應T細胞數，根據陽(yáng)性細胞數（即顯色的斑點(diǎn)數）來(lái)判斷患者結核分枝桿菌感染狀態(tài)，輔助臨床診斷和排篩結核。
4. 器官移植
案例：器官移植之前，應用ELISpot對供體與受體做免疫相容性檢測，HLA匹配，則供受體細胞之間相容性好，較少刺激物斑點(diǎn)，提示移植手術(shù)成功率高，反之亦然。在器官移植手術(shù)后，用ELISpot監視患者體內的免疫排斥反應，可以有針對性的用藥，避免盲目的使用免疫抑制劑。
5. 免疫學(xué)基礎研究
案例：根據檢測的細胞因子的不同，ELISpot可以用來(lái)區分被激活的不同的T細胞亞群。例如Th1細胞主要分泌IFN-γ，IL-2和TNF-α，而其他一些細胞因子如IL-4，IL-5和IL-13一般是由Th2細胞分泌的。在過(guò)敏研究中的一個(gè)熱點(diǎn)就是采用ELISpot測定Th2型細胞因子，因為Th2反應是過(guò)敏的主要反應，但通常都是低頻率岀現，需要高度靈敏方法才能被成功檢測到。
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參考文獻：
[1]Ma M, Li X, Zhong M, Li X, Yu J, et.al. Galloylated Toll-Like Receptor 7/8 Agonist Nanovaccine for Enhanced Tumor Antigen Delivery in Personalized Immunotherapy. ACS Nano. 2025 Apr 1;19(12):11900-11912. doi: 10.1021/acsnano.4c15442.
[2]Patton KS, Harrison MT, Long BR, et.al. Monitoring cell-mediated immune responses in AAV gene therapy clinical trials using a validated IFN-γ ELISpot method. Mol Ther Methods Clin Dev. 2021 May 29;22:183-195. doi: 10.1016/j.omtm.2021.05.012.
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