新品丨TotalSeqTM B and C，我們不一樣，不一樣

TotalSeq^TM-B和TotalSeq^TM-C告訴你

即便是雙胞胎

也可以保持迥異風(fēng)格

第二代高通量單細胞測序是將單個(gè)細胞中微量的轉錄組mRNA通過(guò)高效擴增后再進(jìn)行高通量測序的技術(shù)。10X Genomics公司作為單細胞測序領(lǐng)域的黑馬，采用基于微流控技術(shù)的單細胞系統，可實(shí)現對細胞群體的劃分與細胞群體間基因表達差異的檢測，是適用于多種研究的黃金方法。而蛋白質(zhì)，作為生命功能的執行者，其含量的變化在生物體的生長(cháng)、應激、疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的功能。但蛋白組水平的研究卻遠遠低于轉錄組水平的研究，為此，BioLegend公司推出了TotalSeq^TM系列產(chǎn)品。該產(chǎn)品可以通過(guò)高通量測序來(lái)分析單細胞水平的蛋白表達，在得到RNA信息的同時(shí)，也可以獲得蛋白的信息，近期TotalSeq^TM家族又添了新成員。

BioLegend公司在持續推出寡核苷酸偶聯(lián)抗體，近期推出了TotalSeq^TM-B和TotalSeq^TM-C產(chǎn)品。TotalSeq^TM-B是與10X Genomics公司最新的Feature Barcoding技術(shù)的Single Cell Gene Expression (3’ v3)相兼容，而TotalSeq^TM-C抗體是與Feature Barcoding技術(shù)的Single Cell ImmuneProfiling (5’)相兼容。 TotalSeq^TM-B和TotalSeq^TM-C抗體不需要購買(mǎi)其它的試劑即可適用于10XGenomics公司的Feature Barcoding工作流程，可用更簡(jiǎn)單的實(shí)驗滿(mǎn)足您對基因表達和免疫分型進(jìn)行同時(shí)分析的要求。而原有的TotalSeq^TM-A抗體則適用于任何poly-dT寡核苷酸結尾的儀器及試劑盒，如10x Genomics Chromium v2和v3試劑盒，此時(shí)必須額外購買(mǎi)用于制備ADT文庫的試劑，另外還有Bio-Rad ddSeq, Fluidigm C1, Celsee Genesis, Drop-seq等其它儀器。

*注：N表示隨機選擇A, C, G或者T。所有Totalseq?-B、C和NYGC抗體都與10X基因組方案相兼容。符號*表示磷酸硫鍵，以防止核酸酶降解。

寡核苷酸序列由以下幾部分組成，PCR引物，特異性標簽序列（即特異性Barcode）以及Capture序列。Totalseq?-A、B、C如下：

TotalSeq^TM-A

TotalSeq^TM-B

TotalSeq^TM-C

Totalseq?操作流程如下：

• 用Totalseq?抗體標記細胞；
• 在單細胞平臺中連同Antibody-Derived Tags(ADT, 寡核苷酸偶聯(lián)抗體)擴增；
• 將ADT-derivedcDNA 與mRNA-derived cDNA分開(kāi)；
• 測序文庫構建；
• 測序。

除Totalseq?-A、B、C系列產(chǎn)品，可以使用戶(hù)同時(shí)得到轉錄組信息和免疫表型信息，其中獨特的Cell Hashing抗體還可以幫助用戶(hù)實(shí)現多重樣本的檢測。即通過(guò)一個(gè)泛指標（人的樣本中使用的是CD298和β2 microglobulin，而小鼠的樣本中使用的是CD45以及H-2 MHC class Ⅰ），給每份樣本分別加上特定的Barcode標記，因此，多份樣本在單細胞測序的環(huán)節可合成一個(gè)樣本進(jìn)行檢測，在后期分析的時(shí)候又能通過(guò)特定barcode的序列特異性將每份樣本分開(kāi)，從而節約單細胞測序的成本。Cell Hashtag包含了不同于經(jīng)典Totalseq?系列產(chǎn)品的擴增handle，使得Hashtag、免疫表型、mRNA文庫可以獨立的進(jìn)行擴增和聚集，可以直接使用。

使用Totalseq?抗體，可以同步檢測mRNA和蛋白質(zhì)的表達量并進(jìn)行聯(lián)合分析，我們可以同時(shí)產(chǎn)生多重數據，降低實(shí)驗的假陰性，并且可以增強細胞類(lèi)型的識別。從而可以實(shí)現mRNA和蛋白質(zhì)的互補和整合，全面闡釋生物基因表達調控機制，對生物體疾病和應激機理進(jìn)行分方位的分析，促進(jìn)了生物醫學(xué)的快速發(fā)展。

主要做單細胞測序需要知道幾個(gè)內容：

• 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)，這個(gè)根據采購的貨號來(lái)尋找；
• Protocol （https://www.biolegend.com/protocols/cell-hashing-and-single-cell-proteogenomics-protocol-using-totalseq-antibodies/5009/）；
• 參考文獻：CITEseq(https://www.nature.com/articles/nmeth.4380),REAPseq (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28854175),cellhashing(https://genomebiology.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13059-018-1603-1);
• NYGC參考網(wǎng)站(https://cite-seq.com/)，包含數據分析的資源；
• 10X網(wǎng)站（https://www.10xgenomics.com/product-list/#single-cell），用來(lái)確認是否把Totalseq抗體需要的試劑配齊。