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    ELISPOT Part 6----PVDF板的乙醇活化

    作者:admin信息來(lái)源:達科為日期:2018年09月12日打印字體:  
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    ELISpot底板材質(zhì)的改進(jìn)

    自1983年ELISPOT技術(shù)創(chuàng )立之初,檢測底板使用的是普通塑料板,但由于塑料板的蛋白吸附能力差,實(shí)驗的靈敏度有限,因此也限制了ELISpot技術(shù)的發(fā)展。1985年,Moller SABorrebaeck CA硝酸纖維素膜作為底板,引入ELISPOT中用于檢測分泌抗體的陽(yáng)性B細胞,獲得了遠優(yōu)于塑料板的結果。

    不過(guò)硝酸纖維素(包括醋酸纖維素)也有自身的不足。由于它是天然纖維素經(jīng)過(guò)人工酯化后獲得的,纖維排列不規則,膜表面平整度差,導致表面形成的斑點(diǎn)外形破碎,高低錯落,并且邊緣彌散。另外,纖維素還存在機械承受力差,化學(xué)穩定性差,不利于長(cháng)時(shí)間保存等缺點(diǎn)。

    1995年,荷蘭Utrecht大學(xué)免疫研究所的Schielen P團隊把一種更優(yōu)于硝酸纖維素膜的PVDF膜引入了ELISPOT檢測中。PVDF是完全人工合成的,可以控制其纖維的長(cháng)度與排列方式,從而獲得幾乎完美的膜結構。相比硝酸纖維素膜,PVDF膜具有更優(yōu)的蛋白吸附性質(zhì),更加均勻的膜結構以及更加精細的顯色條帶分辨率。因此,PVDF的引入是繼硝酸纖維素膜之后,ELISPOT底板材料的又一次重大突破。至今,除了BD公司還在沿用硝酸纖維素膜板外,其余全球所有的ELISpot試劑公司都用PVDF膜取代了硝酸纖維素膜。

     

    PVDF膜的乙醇活化

    由于PVDF膜是疏水性的,因此在使用前須用乙醇潤濕后才能使用。酒精活化的PVDF膜板可以顯著(zhù)強化斑點(diǎn)的清晰度和可讀性,增加斑點(diǎn)數量,提高ELISPot檢測的靈敏度。

     

    乙醇活化PVDF膜的快速指南

    乙醇活化—乙醇的濃度和加入的時(shí)間是關(guān)鍵

    MSIP和IPFL板:每孔加入15 μl 35%的乙醇溶液,潤濕時(shí)間不超過(guò)1 min;

    MAIPSWU板:每孔加入50 μl 70%的乙醇溶液,潤濕時(shí)間不超過(guò)2 min;

    板子的清洗:每孔加入200 μl的無(wú)菌水進(jìn)行清洗,重復5次。

    加入包被抗體:每孔加入100 μl PBS稀釋好的包被抗體,4℃包被過(guò)夜。

     

    乙醇活化PVDF膜的注意事項:

    未潤濕的PVDF膜潔白,不透明的;經(jīng)乙醇潤濕后,顏色變暗,呈半透明狀,很容易觀(guān)察二者的區別。

    加乙醇時(shí),槍頭應該靠在孔壁接近孔底的地方,注意槍頭不要刺到PVDF膜。

     若加入的乙醇掛在孔壁上,蓋上板蓋,輕輕叩擊,讓乙醇順勢滑落。乙醇一旦接觸到PVDF膜,就會(huì )在表面張力和毛細作用下迅速浸潤整塊膜,使得膜的顏色和透明度發(fā)生變化。

    乙醇加入的體積是經(jīng)過(guò)優(yōu)化的,請勿隨意加大或減少用量。

    膜在潤濕后避免過(guò)長(cháng)時(shí)間的孵育,因為酒精的揮發(fā)會(huì )導致膜的高疏水性。

    預濕后的乙醇必須被有效的清洗掉,因為殘留的乙醇會(huì )干擾斑點(diǎn)的形成。

     


    為方便中國客戶(hù)的學(xué)習,Mabtech廠(chǎng)家專(zhuān)門(mén)在優(yōu)酷上傳了《酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)(ELISpot),PVDF板的乙醇活化》的操作視頻,小伙伴們可以更清晰的學(xué)習到PVDF膜的活化操作喲!


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