新產(chǎn)品jetCRISPR?——用于基因編輯的RNP轉染試劑

CRISPR/Cas9核酸酶系統，是一個(gè)強大且高特異性的基因編輯工具。CRISPR/Cas9是一個(gè)雙組分系統，由gRNA引導Cas9核酸酶到基因組的特異性靶向序列，從而進(jìn)行基因編輯，如突變、插入或刪除。

jetCRISPR?是一種全新的專(zhuān)門(mén)為CRISPR/Cas9設計的RNP轉染試劑，可帶來(lái)更高的CRISPR基因編輯效率，同時(shí)保持極佳的細胞活性和狀態(tài)?？靵?lái)試試優(yōu)異的CRISPR/Cas9 RNP轉染試劑吧！

jetCRISPR?專(zhuān)為高效轉染RNP(gRNA和Cas9蛋白復合物)而開(kāi)發(fā)，可在多種類(lèi)型細胞中進(jìn)行多靶點(diǎn)的高效Cas9基因編輯。(圖1和圖2)

圖1: 使用jetCRISPR?，在HeLa細胞中進(jìn)行高效基因編輯。

在96孔板中進(jìn)行HeLa細胞RNP轉染，每孔0.3 μl的jetCRISPR?試劑和幾種濃度的Cas9蛋白和HPRT1 SgRNA或陰性對照。轉染48h后，T7消化產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳分析并用BET染色，用G:Box紫外成像儀(Syngene^?)進(jìn)行成像。圖像經(jīng)Genesnap軟件(Syngene^?)采集，INDEL%使用Genetools軟件(Syngene^?)確定。

1: 完整的1083bp片段, 2: 827bp長(cháng)片段, 3:  256bp短片段.

圖2: jetCRISPR?基因編輯效率優(yōu)于同類(lèi)型產(chǎn)品

在96孔板培養的A549和HEK-293細胞中轉染RNP，每孔0.3 μl的jetCRISPR?或Lipofectamine? CRISPRMAX?，30 nM RNP(Cas9蛋白和HPRT1 sgRNA)。轉染48h后，采用T7核酸內切酶方法計算INDEL%，評估基因編輯效率，INDEL%使用Genetools軟件(Syngene^?)確定。

Polyplus的轉染試劑對細胞極其柔和，細胞因此能在整個(gè)轉染過(guò)程中保持極佳的活性和狀態(tài)。jetCRISPR?兼容血清和抗生素，因此RNP轉染可在利于細胞活性的優(yōu)化培養條件下進(jìn)行。 

圖3: jetCRISPR?轉染48h后，極佳的細胞活性和狀態(tài)

在96孔板中用30nm RNP(Cas9蛋白和HPRT1 sgRNA)和0.3 μl的jetCRISPR?轉染HEK-293和A549細胞，轉染48h后，使用phase contrast ZOE Fluorescent Cell Imager (BIORAD^?)觀(guān)察細胞狀態(tài)。 

轉染Cas9蛋白比轉染質(zhì)粒， 可以更快的進(jìn)行基因編輯。使用jetCRISPR?轉染Cas9蛋白和gRNA可進(jìn)行快速可靠的基因編輯(圖4)。此外，Cas9蛋白可以比質(zhì)粒更快從細胞中被清除，從而減少了脫靶效應，可以更特異的進(jìn)行基因編輯 (Kim S, et al; Genome Research 2014; 24:1012–1019)。

圖4: 在HEK-293細胞中，使用jetCRISPR?進(jìn)行快速可靠的基因編輯

在HEK-293細胞中進(jìn)行RNP轉染，96孔板每孔30nM RNP(Cas9蛋白和HPRT1 sgRNA)和0.3 μl的jetCRISPR?或0.3 μl的Lipofectamine^? CRISPRMAX?。轉染48h后，采用T7核酸內切酶方法計算INDEL%，評估基因編輯效率，INDEL%使用Genetools軟件(Syngene^?)確定。

jetCRISPR?為即用型溶液。RNP轉染過(guò)程簡(jiǎn)便：RNP復合體形成、加入轉染試劑、再加到孔中。jetCRISPR?適用于正向轉染和反向轉染，因此可以很方便的根據細胞調整實(shí)驗操作，以獲得合適效果。使用反向轉染操作比正向轉染提前一天獲得實(shí)驗結果(圖5)。

圖5: jetCRISPR?正向轉染和反向轉染操作步驟

gRNA和Cas9成功進(jìn)入目標細胞，是高效基因編輯必不可少的部分。然而，使用無(wú)DNA的方案，即Cas9以蛋白/gRNA復合物方式導入細胞，更有吸引力。因為它克服了DNA入核的主要屏障，同時(shí)避免不必要的DNA整合。此外，導入Cas9蛋白更容易調控Cas9的表達，從而減少了Cas9核酸酶的脫靶活性。這是為什么科學(xué)家們需要可靠的轉染試劑，來(lái)實(shí)現這個(gè)應用。

我們?yōu)镃RISPR實(shí)驗提供了全套解決方案 (表1和圖6):

?jetCRISPR?轉染RNP –蛋白和gRNA共轉染

?jePRIME^?用于CRISPR DNA質(zhì)粒方案

?jetMESSENGER?用于RNA轉染(gRNA和mRNA共轉染)

?in vivo-jetPEI^?用于DNA活體轉染(Zuckermann et al. (2015) Nat Commun6, 7391; He et al. (2016) PLoSPathog 12. E1005743)

表1:專(zhuān)為CRISPR實(shí)驗設計的轉染試劑

圖6：為CRISPR實(shí)驗設計的體外轉染試劑

Polyplus-transfection^?，中文名保利嘉，是來(lái)自法國的一家專(zhuān)注核酸轉染的生物技術(shù)公司。因為專(zhuān)注所以專(zhuān)業(yè)，其產(chǎn)品適用于體內和體外轉染，包括DNA、siRNA及其他寡核苷酸、蛋白和多肽轉染。高效率、低毒性、操作簡(jiǎn)便和高性?xún)r(jià)比的產(chǎn)品受到廣大科研工作者喜愛(ài)，廣泛應用于基因功能研究、蛋白生產(chǎn)、病毒包裝和動(dòng)物模型的構建。公司于2002年獲得ISO9001證書(shū)。