IP干貨帶著(zhù)促銷(xiāo)它來(lái)了-重鏈輕鏈非特異結合怎么辦？

免疫沉淀 (Immunoprecipitation，IP) 是利用抗原抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法?？贵w與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結合后，再與ProteinA/G偶聯(lián)的agarose或Sepharose珠子孵育，通過(guò)離心得到珠子-蛋白A/G-抗體-目的蛋白復合物，沉淀經(jīng)過(guò)洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，煮沸5-10min，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，離心收集上清，上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。
 

圖1.IP原理及流程

在免疫沉淀實(shí)驗后的WB驗證環(huán)節中，當使用常規的 Anti-IgG (H+L) 酶標二抗時(shí)，通常會(huì )出現對應免疫沉淀一抗變性后產(chǎn)生的重鏈（50kDa）和輕鏈（25kDa）兩條帶。如果檢測的目的蛋白分子量在此附近時(shí)，就會(huì )受到這兩條帶的干擾。
 

圖2.傳統二抗WB驗證IP，重鏈輕鏈干擾

那么如何避免避免IP檢測過(guò)程中的重、輕鏈干擾，達科為可為您提供兩種解決方案：

方案一：WB抗體和IP抗體選擇不同種屬

方案二：選擇只識別天然二硫鍵構象的二抗

Rockland TrueBlot^?二抗，是一系列單克隆二抗，與傳統二抗不同的是，TrueBlot^?二抗只識別天然二硫鍵的IgG，而不識別被還原打開(kāi)的二硫鍵，因此可以消除IP檢測過(guò)程中變性抗體重鏈和輕鏈的影響。

圖3.Rockland TrueBlot?二抗vs 傳統二抗

TrueBlot^?系列產(chǎn)品注意事項

1. TrueBlot^?產(chǎn)品適用的前提：當IP抗體與WB一抗同源。

2. Rabbit TrueBlot^?不能與Protein A/G結合的Beads一起用。推薦TrueBlot^?配套的Beads。

3. 非IP驗證的WB實(shí)驗也可使用TrueBlot^?系列產(chǎn)品避免重鏈和輕鏈的影響。

促銷(xiāo)活動(dòng)

促銷(xiāo)活動(dòng)活動(dòng)范圍：Rockland全系列二抗（包括TrueBlot^?系列二抗）

活動(dòng)內容：請咨詢(xún)當地業(yè)務(wù)員

活動(dòng)時(shí)間：即日起到9.30日

活動(dòng)代碼：DIST-Q3CNSEC

Rockland熱賣(mài)TrueBlot?產(chǎn)品列表

歡迎聯(lián)系當地業(yè)務(wù)員索取高清版TrueBlot^?選擇指南